分别收集EGF剌激0min、5min、10min和30min的184A1乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTRAQ试剂中的114Da、115Da、116Da和117Da不同同位素标记。将它们等量混合,采用抗泛酪氨酸磷酸化抗体进行免疫沉淀,再经过固相金属亲和层析(Im¬mobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)进一步纯化,最后用LC-MS/MS
A. iTRAQ只能相对定量,就像上述研究中通过不同实验组的比较才能获得酪氨酸磷酸化的比例
B. 因为基于抗体免疫沉淀,所以不可能发现新的参与该过程的酪氨酸磷酸化蛋白质
C. 对磷酸化肽段肯定能鉴定分析出来,但对去磷酸化就无能为力了
D. 依据不同蛋白质磷酸化出现的先后顺序,可以建立它们之间的上下游关系,从而动态地了解EGFR信号通路的转导过程
E. 生物信息学分析在整个研究过程中用不上
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